Née à Rennes, Stéphanie d'Oustrac étudie le chant au CNSM de Lyon, où elle obtient un premier prix en 1998. Dans le cadre de sa formation, elle a l'occasion d'aborder différents opéras (l'Enfant et les Sortilèges de Ravel, Didon et Enée de Purcell, Une Éducation manquée de Chabrier) et oratorios (la Création de Haydn, la Passion selon saint Matthieu de Bach).
En octobre 1998, Stéphanie d'Oustrac est retenue pour le rôle de Médée dans Thésée de Lully que William Christie dirige, à l'Académie d'Ambronay puis en tournée. Le fondateur des Arts Florissants lui confie ensuite le rôle-titre d'un autre ouvrage de Lully, les Métamorphoses de Psyché, mis en espace par J.-M. Villégier à Cherbourg, Lyon, Caen, Bordeaux, ainsi qu'à l'Opéra-Comique.
L'année 1999, après Pénélope de Fauré à l'Opéra de Rennes, est marquée par la résurrection de la Purpura de la Rosa de Torrejon y Velasco (le premier opéra créé en Amérique latine, en 1701), sous la baguette de Gabriel Garrido, d'abord au Grand-Théâtre de Genève, puis au Teatro de la Zarzuela de Madrid.
Début 2000, Stéphanie d'Oustrac participe à la tournée de la trilogie des opéras de Monteverdi dirigée par Jean-Claude Malgoire. Puis elle incarne Zerline (Don Giovanni) à Rennes et à Tours, avant de retrouver William Christie au Festival d'Aix-en-Provence, pour le Retour d’Ulysse dans sa patrie de Monteverdi. Elle a été très remarquée pour son interprétation de Didon dans l’opéra de Purcell en tournée en Europe et aux États-Unis avec les Arts Florissants.
Elle interprète Chérubin dans les Noces de Figaro, Mercedes dans Carmen à l’Opéra de Paris, le rôle-titre de la Périchole à l’Opéra de Marseille, à Nancy et à Caen, le rôle de Nicklausse dans les Contes d’Hoffmann à Lausanne sous la direction de Marc Minkowski, le rôle de Didon dans Didon et Enée de Purcell. Stéphanie d’Oustrac chante le rôle d’Ascagne dans les Troyens de Berlioz sous la direction de Sir John Eliot Gardiner au théâtre du Châtelet. Elle incarne Argie dans les Paladins au Théâtre du Châtelet, à l’Opéra de Caen, au Barbican de Londres et à Shanghaï, aborde le rôle-titre de Médée de Charpentier à Metz, Lyon et Versailles. Elle vient de reprendre le rôle principal de la Périchole à l’Opéra de Montpellier.
En concert, Stéphanie d'Oustrac a notamment interprété le Requiem de Suppé à l'Auditorium de Lyon, les Nuits d'été de Berlioz au Festival de Deauville, dirigées par Christopher Hogwood. Elle se produit dans de nombreux récitals de lieder et mélodies en France et à l'étranger, et vient de participer à une série de concerts aux États-Unis avec les Arts Florissants sous la direction de William Christie.
Stéphanie d'Oustrac a été nommée «révélation de l’année» aux Victoires de la Musique 2002.
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