Alessandro De Marchi a d'abord étudié l'orgue et la composition au Conservatoire Sainte Cécile de Rome, puis le clavecin, la basse continue et la musique de chambre à la Schola Cantorum Basiliensis. C'est là qu'il eut l'occasion de travailler avec Jesper Christensen qui l'influenca et le guida dans la recherche philologique sur les manuscrits et les traités de musique ancienne.
Sa collaboration avec René Jacobs, comme claveciniste et assistant a commencé avec Orontea de Cesti à Bâle en 1989 ; il a par la suite dirigé cette ouvre dans de nombreux théâtres européens. Après avoir observé De Marchi en répétition de Cleopatra e Cesare de Graun en 1992, Daniel Barenboim l'a invité à travailler régulièrement au Deutsche Staatsoper Berlin, d'abord comme assistant puis comme chef invité. Il a dirigé de nombreuses représentations de Il matrimonio segreto de Cimarosa, L'isola disabitata de Haydn et Il barbiere di Siviglia de Rossini. Il est également très sollicité comme chef invité par des salles et festivals européens dont le Festival d'Innsbruck, le Théätre de la Monnaie à Bruxelles, le Teatro Regio à Turin et le Concertgebouw d'Amsterdam.
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